液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来高效。
液相色谱仪的组成:
1、输液系统
包括溶剂柜、真空脱气机、溶剂混合器、高压泵等,其中核心部分是泵;泵的作用提供足够的驱动力使流动相通过填充紧密的色谱柱。
洗脱方式也分为两种:
(1)等度洗脱:在同一分析周期内流动相组成保持恒定,适合于组分数目较少,性质差别不大的样品。
(2)梯度洗脱:采用两种(或多种)不同极性的溶剂,在分离过程中按一定程序连续改变流动相的浓度配比和极性的一种洗脱模式。用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。
2、进样系统
把分析试样有效地送入色谱柱进行分离。一般有自动进样器和手动进样器,进样量应不小于定量环体积的5-10倍(最少3倍)。
3、分离系统
主要是色谱柱,色谱柱是一根装满填料的管子。色谱柱的材料有不锈钢、塑料、玻璃等,其尺寸(内径、长短)不尽相同;色谱柱填料主要有硅胶基质和聚合物基质,填料的粒径不尽相同。
4、检测器
对检测器的要求:灵敏度高、重现性好、线性范围宽、死体积小、对温度及流量的变化不敏感等。主要有紫外检测器、荧光检测器、示差检测器等。
结构特点:
1、液相色谱仪是以液体作为流动相的色谱分离方法;
2、流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用;
3、适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的大分子化合物(常温进样不破坏药